细胞复苏的原则——快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。

　　具体操作

　　（一）实验前准备：

　　1.将水浴锅预热至37℃

　　2.用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。

　　3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

　　（二）取出冻存管：

　　1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

　　2.从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。

　　（三）迅速解冻：

　　1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。

　　2.约1-2min后冻存管内液体*溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。

　　（四）平衡离心：

　　细胞用架盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min 离心3min

　　（五）制备细胞悬液：

　　1.吸弃上清液。

　　2.向离心管内加入10ml培养液，吹打制成细胞悬液。

　　（六）细胞计数：

　　细胞浓度以5×105/ml为宜。

　　（七）培养细胞

　　将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃和5％CO2的培养箱内2-4小时（或者24-48小时）后换液继续培养培养，换液的时间由细胞情况而定。

　　初学者易犯错误：

　　1水浴锅未预热或者未预热到37℃。

　　2.水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。

　　3.离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。

　　4.一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。