脂肪组织特别是白色脂肪组织（WAT）已经被证实除了具有能量储存功能外，还与内分泌和器官炎症有关。从脂肪组织中提取和分析蛋白质对于了解许多生理/病理状态越来越重要。但是由于白色脂肪组织（WAT）和棕色脂肪组织（BAT）中高脂肪和低蛋白含量，所以在技术上挑战性。

*目前生物样品中水油乳化物zui难分离，具有*表面性质的带孔径的离心管柱和优化的无表面活性剂的缓冲液系统，可以快速有效的从脂肪组织匀浆中将水油乳化物分离。提取缓冲液比脂肪组织中的油冰点低，脂肪组织匀浆通过离心管柱能将水相和油相迅速分开，组织中的总蛋白无丢失。蛋白质得率可达 2-3 mg/ml，远远高于其他方法。

柱式法 Minute TM 脂肪组织和细胞的总蛋白提取操作步骤：

从脂肪组织中提取蛋白（白色脂肪组织或棕色脂肪组织）

1. 将缓冲液 A，离心管柱和接收管套管放置于冰上预冷。

2. 秤取 50-80 mg 新鲜或冷冻脂肪组织，把它放在几层纸巾上，用拇指和食指挤压，从组织中去除一部分油。用镊子将组织放入试剂盒提供的 1.5 ml 离心管中，秤取 100 mg 蛋白提取粉加入样品中。加入 50ul 缓冲液 A。

3. 用研磨棒扭转研磨组织样品 1-2 分钟成浆状。再加入 200-300ul 缓冲液 A，继续研磨样品 30 秒钟。如果起始组织量较小（20-40 mg）需要加入 100-150ul 缓冲液 A。

4. 盖上盖子，2000rpm 离心 1 分钟。将上清液转移到放置在接收管里的离心管柱中（研磨棒可以重复使用，用酒精擦拭清洁，空气干燥）。

5. 在-20℃，开盖孵育 15-20 分钟。（请确保冰箱温度在-20℃ 附近，否则参照下面的常见问题）

6. 孵育后立刻在 2000rpm，开盖离心 1-2 分钟。弃去离心管柱，所得为脂肪组织中的总蛋白。提取出的蛋白中含有少量不溶物为非水溶性细胞组分。可以将其稀释后直接用于 ELISA 检测水溶性蛋白。也可以用缓冲液 B 或 C 重悬溶解非水溶性蛋白用于下游应用：

A. 在提取出的蛋白溶液中加入 1/10 缓冲液 B 成为变性蛋白溶液（用于 SDS-PAGE，Western 和其他应用）或者B. 在提取出的蛋白溶液中加入 1/10 缓冲液 C 成为非变性蛋白溶液（用于 IP，ELISA 和其他应用）或者C. 用 2X 的 2D 胶样品缓冲液溶解用于 2D 分析。

注意：缓冲液 A 中含有可能会感染质谱分析的组分。如果提取的蛋白用于质谱分析，在提取前需透析缓冲液，或者用 TCA 法沉淀蛋白。

从脂肪细胞中提取蛋白

1. 低速离心收集 50-100million 脂肪细胞。在 1.5 ml 离心管中加入 1 ml 预冷的 PBS（可根据上述建议加入磷酸酶抑制剂或者蛋白酶抑制剂）重悬细胞。加入 100 mg 蛋白提取粉

2. 3000rpm 离心 3 分钟，弃去上清液。用研磨棒扭转研磨 1-2 分钟使细胞匀浆。加入 200-300ul 缓冲液 A，继续研磨 30 秒。

3. 2000rpm 离心 1 分钟，然后将上清液转移到预冷的离心管柱接收管套管中。接转以上步骤 5-6