电话:
021-67610176传真:
1 原 理
将试样和对照织物分别放于三角瓶中,用含有肉汤培养基的试验菌悬液接种于试样和对照织物上,经培养后,分别将培养前后试样上的细菌洗下,测定细菌的数量,可计算出试样上细菌减少的百分率。该方法适用于溶出性抗菌织物抗(抑)效果的检测。
2 实验器材
(1)实验菌株 金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)
(2)试样 在距试样布边 10cm 以上、离布端 1m 以上部位,剪取直径为 5cm 的圆形试样若干(需用试样数量要根据纤维类别及织物织法而定,以能吸收1ml 菌液且三角瓶中不留残液为度)。另同法剪取对照织物若干,取 3 份试样和 2 份对照织物分别装于三角瓶中,盖好瓶口,121℃ 15min灭菌备用
(3)肉汤培养基
(4)胰蛋白胨大豆琼脂培养基
(5)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH为7.2~7.4)
(6)恒温水浴箱
(7)37℃培养箱
3 菌悬液的制备
用接种环将保存的菌种以划线法接种到营养琼脂平皿上,在 37℃恒温培养箱中培养 24h,取平皿上典型的菌落移种到含肉汤培养基的三角瓶中,在 37℃条件下培养 24h,用肉汤对培养液进行系列稀释,使菌悬液的含菌量为 1×105cfu/mL~5×105cfu/mL。
4 试验步骤
(1)分别取 1mL 菌悬液加在 3 份准备好的三角瓶内的织物上,确保其均匀分布,且三角瓶中不留多余液,封好瓶口,以防蒸发。
(2)分别在一个盛有试样和对照织物的三角瓶中加入 100mL 缓冲液,剧烈摇晃 1min 洗涤细菌,取 1mL 做系列1 0倍稀释,选适当稀释度以倾注法接种平皿,作为“0”接触时间样品和对照织物上的细菌数。
(3)将另一个装有接种试样的三角瓶在 37℃恒温培养箱中培养 20h±2h,然后加入 100mL缓冲液,剧烈摇晃 1min 洗涤细菌,取 1mL 做系列10倍稀释,选适当稀释度以倾注法接种平皿,作为试验组。
(4)试样不接种菌悬液,在“0”接触时间加入 100mL 缓冲液,剧烈摇晃 1min 取样,接种平皿,作为阴性对照组。
(5)另取1个装有对照织物的三角烧瓶,接种 1mL 菌悬液后,在 37℃ 恒温培养箱中培养20h±2h,然后加入 100mL 缓冲液,剧烈摇晃 1min 洗涤细菌,取 1mL 做系列10倍稀释,选适当稀释度以倾注法接种平皿,作为阳性对照组。
(6)将阴性和阳性对照样本与试验组样本一并放入 37℃恒温培养箱中培养48h,计数菌落数。
(7)试验重复3次。
(8)结果计算
B或C或(B+C)/2-A
抑菌率(%)= ×100
B或C或(B+C)/2
试验组试样上的细菌数; “0”接触时间试样上的细菌数;
“0”接触时间对照织物上的细菌数;
如果“B”和“C”差别较大时,取较大值;如果“B”和“C”差别不大时,取平均值。
5 评价规定
“0”接触时间对照织物的平均菌落数应在 1×103cfu/mL~5×103cfu/mL。 阴性对照应无菌生长,阳性对照菌数比“0”接触时间的菌数明显增加。 各次试验的抑菌率均≥50%,即判定该样片具有抗菌作用。
6 注意事项
对织物进行染菌操作时,应确保其均匀分布,且三角瓶中不沾染或存留多余菌液。 三角瓶内的织物染菌后,应将瓶口封好,以防液体蒸发,造成细菌死亡。