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1 原 理
在液体中通过快速长时间振荡, 增加微生物与抗(抑)菌产品内抑菌剂的接触以显示其抑菌作用。试验根据抑菌率大小判断其是否具有抑菌能力。本试验适用于对非溶出性抗(抑)菌织物的抗(抑)菌效果鉴定。
2 实验器材
(1)实验菌株 金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(ATCC 10231) 菌悬液的制备方法见2.1.2。根据抑菌剂特定用途也可用其他菌悬液
(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH值7.2)
(3)振荡摇床 (300r/min)
(4)三角烧瓶
(5)营养琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)与沙堡琼脂培养基
3 操作程序
(1)将抗菌物品剪切成 10mm×10mm 样片,称取 0.75g 2份分别置入 250mL 的三角烧瓶中。
(2)在上述三角烧瓶中加入 70mL PBS和 5mL菌悬液,使菌悬液在PBS中的浓度为1×104cfu/mL~5×104cfu/mL。
(3)将三角烧瓶固定于振荡摇床上,在作用温度为 20℃~25℃ 的条件下,以300r/min分别振摇 2min、1h。吸取 1.0mL 用PBS作适当稀释至10-2,作为试验组振荡前样液。
(4)分别吸取振荡前和振荡后样液及适当稀释度的稀释液各 1.0mL,以琼脂倾注法接种平皿,每个样液接种2个平皿,按照2.1.3规定的方法进行活菌培养计数。
(5)试验同时设阴性对照样片和不加样片组。对照样片组以不含抗菌剂的材质、大小相同的样片代替抗菌样片外, 其它操作程序均与实验组相同。 不加样片组分别取 5mL菌悬液和 70mL PBS加入 250mL 三角烧瓶中,混匀,分别于振荡前和振荡后 1h,各取 1.0mL 菌悬液与PBS的混合液做适当稀释。同上,按2.1.3法进行活菌培养计数。
(6)以试验同批次的稀释液、培养基分别设阴性对照。
(7)试验重复3次,按下式计算抑菌率
抑菌率=(样品振荡前平均菌落数-样品振荡后平均菌落数)/样品振荡前平均菌落数×100%
4 评价规定
(1)各次试验阴性对照均应无菌生长。
(2)不加样片组活菌计数在 1×104cfu/mL~5×104cfu/mL之间, 且样本振荡前后平均菌落数差值在 10% 以内, 试验有效。
(3)各次试验中,试验样片抑菌率与对照样片抑菌率的差值菌>26%, 即判定该产品具有抗菌作用。
5 注意事项
振荡前须将振荡摇床上的三角烧瓶固定牢,以免碰破。
试验中,在实验误差允许的范围内,如果试验组和对照组出现振荡后菌落数高于振荡前 菌落数的情况,其抑菌率可按“0”计算。