1 原  理 

本方法通过模拟洗衣机的洗衣过程，检测除（杀）菌洗衣粉（剂）的抗菌作用。

2 实验器材 

（1）实验菌株  大肠杆菌（8099或ATCC11229），金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）

（2）培养基  营养琼脂A 琼脂含量为1.5% 

            营养琼脂B在营养琼脂A中另加入1.5 %的琼脂 

            营养肉汤 

            胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）  

（3）牛血清白蛋白（过滤除菌）

（4）烷基酚聚氧乙烯醚（Tergitol）

（5）碳酸钠  

（6）标准硬水

（7）非离子浸湿剂

（8）冲洗溶液  

（9）含0.5 % 吐温的磷酸盐缓冲液  

（10）吐温80（过滤除菌）

（11）无菌去离子水或蒸馏水 

（12）不锈钢转轴由一条直径0.16cm 不锈钢丝制成

（13）有金属螺盖的玻璃罐容积为470mL，可高压灭菌，并可放入转轴的广口罐，将罐口覆盖牛皮纸，加盖，于121℃灭菌25min备用 

（14）转动速度为45r/min～60r/min 的滚动摇床

（15）可调恒温水浴箱 

（16）吸管（1mL、5mL、10mL）

（17）培养皿 

（18）铺有滤纸的玻璃培养皿

（19）菌种保存管

（20）细菌培养箱

（21）涡流振荡器

（22）细菌比浊仪 

（23）棉布32织纱/cm × 32 织纱/cm 平织棉布 

（24）别针、镊子、无菌手套、3mm～5mm玻璃珠、秒表、载体布片2.5cm×3.75cm

3 实验准备 

（1）测试棉布的制备 

1）非离子浸润剂的制备：取 5g烷基酚聚氧乙烯醚，5g 碳酸钠加入到1L 去离子水中。

2）洗涤液的制备：1.5g 非离子浸润剂，1.5g 碳酸钠，加入到3L去离子水中。 将大约300g 测试棉布加入3L 洗涤溶液，加热煮沸1h，取出棉布在煮沸的去离子水中清洗  5min，然后放入凉去离子水中 5min，以去除残留的浸润剂，然后将棉布晾干。

（2）测试棉布和转动支架的准备：取处理过的棉布，剪成5cm 宽，重量为15g 1g的布条，将其一端插入固定在测试转动支架的水平方向的外边，然后在三条水平支架间以足够的张力缠绕12个整圈，将布条的另一端用不锈钢别针固定在前一圈布条上。zui后以121℃压力蒸汽灭菌15min，备用。    

（3）细菌悬液的制备：取0.5mL 营养肉汤冻干的菌种溶解，接种于含10mL 的营养肉汤的试管，于35℃2℃培养 24h。 然后振荡混合均匀。用10μL接种环在营养琼脂平板上划线，置于35℃2℃ 培养24h。然后从平板上挑取单个菌落种入菌种保藏管中，上下摇动10次，吸弃多余液体，置 -85℃冰箱保存。试验前，从菌种保藏管中取出一粒带菌小颗粒放入营养琼脂斜面，晃动斜面。将斜面至35℃培养24h。每天转种1次，连续传三代。 
第四天，用5mL PBS洗脱斜面上的菌苔， 取0.5mL 加入到含9.5mL PBS的试管中，混匀，取1mL～2mL加入含有20mL 营养琼脂B的细胞培养瓶中，晃动培养瓶使菌液覆盖整个琼脂表面。吸弃多余菌液，然后将培养瓶倒置平放在35℃培养箱中培养24h。 
用5mL PBS和3g 灭菌玻璃珠洗脱细胞瓶中的菌体，用PBS调整浓度至1×108cfu/mL～5×108cfu/ml，然后加入等量 3.0% 的牛血清白蛋白。 

（4）染菌载体的制备：每片载体接种20μL菌悬液，放回培养皿中，加盖，于35℃2℃ 在培养箱中干燥20min。  

（5）测试样品的制备：至少在实验开始前20min， 将盛有265mL硬水的玻璃罐在水浴箱中恒温至测试温度（25℃1℃）。加入被测试样品混合溶解。

4 实验步骤 

（1）将2片染菌载体放入转动支架的第6和7层布条之间，将第3片放入第7和8层布条之间。 

（2）以无菌操作方式将转动单元（支架、布条和染菌载体）放入含有测试产品的玻璃罐中，加盖。 

（3）玻璃罐固定在摇床上，滚动旋转洗涤20min，取下玻璃罐。 

（4）以无菌操作方式，取出转动单元，取出3片染菌载体，放入到含有 30mL 含0.5% 吐温80的PBS）的试管中，在振荡器中混合10s。然后振打200次， 用PBS做10倍系列稀释，并选择适宜稀释度样液接种TSA平板。每个稀释度接种2个平板。 

（5）对照组除用 0.5% 吐温80替代测试产品外，其它实验条件和步骤均与试验组相同。 

（6）菌数对照：将3片染菌载体加入含有30mL 0.5% 吐温80 的PBS试管中，在振荡器振荡10s，然后振打80次， 用PBS做系列10倍稀释，并取适宜稀释度样液 1.0mL，以倾注法接种TSA平板，每个稀释度接种2两个平板。 

（7）将试验组、对照组和菌数对照组平板倒置于 35℃2℃ 培养箱中培养48h  4h，计数菌落数。 

（8）以试验同批次的稀释液、培养基等分别设阴性对照。

（9）结果计算 
试验重复3次。记录并计算测试样品的细菌总数，求其平均值。 用下列公式计算除菌率： 
抑菌率（%）=（A-B）/A ×100%   
其中A为实验前对照样品的菌落数；B为试验后实验样品的菌落数。

5 评价规定

各次阴性对照均无菌生长，对照组回收菌数应为1×106cfu/片～5×106
cfu/片，抑菌率达到50%者，判定为有抗菌作用。

6 注意事项 

（1）将旋转单元放入玻璃罐后应将盖子盖紧，以防转动时漏水。

（2）试验时应严格无菌操作，以防止杂菌污染。