1 原  理 

本试验通过模拟适合细菌生长、繁殖和可能产生感染的皮肤条件下，使用随机性、双盲的、配对比较的方法，检测抗（抑）菌样品12h或24h的滞留抑菌效果。

2 实验器材 

（1）试验产品  试验品为25套按顺序编号的样品。每套2块，一块为测试样品皂，另一块为不含抗（抑）菌剂的对照样品  

（2）不含抑菌剂的洗发液和沐浴液各25瓶（200mL/瓶，试验调整阶段用） 

（3）不含抑菌剂的香皂 25块（试验调整阶段用） 

（4）胰蛋白酶大豆肉汤培养基（TSB） 

（5）胰蛋白酶大豆琼脂培养基（TSA） 

（6）0.075mol/L的磷酸盐缓冲液     

（7）70%酒精 

（8）恒温培养箱 

（9）金属筒 （直径2.2cm、高度3cm）

（10）一次性接种环（直径4mm） 

（11）小塑料碗（直径2.2cm、高2.5mm） 

（12）胶带（Darapore，3M公司生产） 

（13）尼龙刮菌棒 

（14）Triton-X 100  500ml 

（15）外用抗生素软膏（例如：百多邦莫匹罗星软膏） 

（16）玻璃弯棒 

（17）羊血 经脱纤维处理 

（18）金黄色葡萄球菌ATCC 27217（此株金黄色葡萄球菌是一种低毒性、对青霉素敏感、对四环素有抗药性的色素株，曾用于许多试验研究，没有任何严重副作用）。 

（19）皮肤消毒剂 

3 试验步骤 

（1）调整阶段 
    试验开始前 7d至 14d， 志愿者使用不含抗（抑）菌成分的香皂、洗发水和沐浴液进行日常的洗手、洗澡。此阶段持续至少 7d，但不超过 14d。 

（2）清洗阶段 
清洗阶段共 3d，志愿者每天用抗（抑）菌样品清洗一侧前臂， 用对照样品清洗另一侧前臂，清洗过程如下： 

1）先清洗左臂，用流动水（水温应保持在 35℃～37℃）打湿前臂内侧；

2） 用香皂从手腕至臂肘上下摩擦15s；

3）用手在涂有香皂的手臂上上下摩擦泡沫45s；

4）用流动的清水冲洗前臂15s， 不要搓擦；

5）用纸巾沾干前臂. 不要搓擦；

6）重复以上步骤清洗右臂； 

7）按上面所描述的试验步骤每日清洗前臂3次，每次间隔至少一个小时，在zui后一次清洗之后，需记录好时间，在 12h之后，进行滞留效果检测。在第9次清洗前臂以后，志愿者不能洗澡、淋浴或洗净前臂，直到试验结束。清洗前后的两块香皂的重量及志愿者完成清洗的情况，须记录下来。 

（3）试验阶段 
清洗阶段的第四天（zui后一次清洗后 12h或24h），将在志愿者每只前臂上划出一个试验区，对试验区进行接种、封包和回收存活细菌，具体步骤如下: 

1）将金黄色葡萄球菌（ATCC 27217）连续转种3代，取第3代培养物接种于胰蛋白大豆肉汤培养基（TSB）中，在 35℃±2℃ 的条件下培养 20h ±2h。然后用胰蛋白酶大豆肉汤适当稀释菌悬液，使菌悬液浓度约为 108cfu/mL～109cfu/mL。

 2）细菌接种：在志愿者的每只前臂中间部位（不要在手腕和肘皱褶处），用带有印墨直径为3.00cm的玻璃量筒扣在皮肤上，划分出一个试验区。使用加样器取10μL上述菌悬液，接种于前臂试验区（菌落数为106cfu/试验区～107cfu/试验区），用一次性接种环，把接种物涂成一圆形，使其与试验区边缘应有 4mm～5mm的距离。 

3）封包：细菌接种后立即用小塑料碗扣于染菌区上面 ，再用胶带将小塑料碗固定在皮肤上，记录封包的时间。 

4）回收存活细菌：接种后 2h±5min 对前臂上接种的区域进行取样。将金属筒放置于试验区中间部位，不要接触到盖有印墨的边缘。将 1mL 含0.1% triton-X100的0.075mol/L磷酸盐缓冲液吸移至金属筒内，用尼龙刮菌棒刮洗金属筒罩住区域内的皮肤 60s，将筒内液体吸移至试管内，再加 1mL 含0.1%triton X-100的 0.075mol/L磷酸盐缓冲液，对该区域内的皮肤进行第二次刮洗 30s，将第二次擦洗的液体，注入含*次刮洗液体的试管中。 

5）实验区试验后的消毒处理: 一个实验区采样之后，需用70% 的酒精对实验区进行消毒。然后对另一个实验区以同样方法进行采样， 采样结束后，先用70% 的酒精对实验区进行消毒，然后用皮肤消毒剂对两只前臂进行消毒处理，处理后清水冲洗，擦干，再涂少量的抗生素软膏。 

6）平皿接种与培养:对每一个取样进行平皿接种，以 0.0375mol/L磷酸盐缓冲液对样品进行10倍系列稀释，选适当稀释度取 0.1mL 接种于2个含5% 羊血的TSA平板表面，用玻璃弯棒涂匀，在 35℃±2℃ 的培养箱中培养 48h±4h，计数菌落数。  

7）以试验同批次的稀释液、培养基等分别设阴性对照。 8）抑菌率的计算 
抑菌率=[ （对照平均菌落数－试验平均菌落数）/ 对照平均菌落数] ×100% 

4 评价规定 

（1）各次试验阴性对照菌无菌生长。 
（2）实验不得少于16人次，抑菌率均≥ 50%，判定该产品在规定的时间内有滞留抑菌作用。 

5 注意事项 

（1）志愿者录用标准 

1）年龄介于18岁至65岁的男性或女性； 

2）志愿者应身体健康； 

3）前臂应完好无损且没有皮肤病及其它皮肤问题； 

4）同意在整个试验期间，避免使用抗（抑）菌洗液和乳膏、局部类固醇类药和全身或局部使用抗生素，除非因为并发病症医生要求使用； 

5）同意在清洗阶段使用非药物香皂或洗液洗澡和淋浴，但志愿者不能清洗前臂。在第9次洗完前臂以后，不洗澡，淋浴或洗净前臂，直到试验结束。

（2）排除志愿者的标准  如果志愿者有下列情况之一，不能被录用参加试验

1）同时参加另外一个临床试验 

2）在过去的 14d中，参加过任何一种形式的关于清洁手或手臂的试验 

3）对香皂、去污剂、香水或青霉素过敏 

4）怀孕妇女 

5）诊断患有糖尿病、肝炎、艾滋病（HIV阳性）等 

（3）其它试验限制 

1）志愿者不得使用其它清洁用品； 

2）志愿者应避免洗热水盆浴和游泳； 

3）志愿者应避免接触未干的油漆、涂料或者其它溶剂；

4）志愿者应避免在手腕处和前臂上喷洒香水。 

（4）在试验完成后的 48h～72h内，需检查前臂上有无小脓疱、水疱，隆起的红色痒疱。出现这些情况的志愿者应尽快通知检验单位。